一、培養(yǎng)體系問(wèn)題
1、檢查細(xì)胞是否存在污染。
(1)如果培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)未添加抗生素，細(xì)胞污染則是不可避免的。
①用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查。
②如果細(xì)胞被污染則要棄掉。
(2)支原體污染不易察覺(jué)，因此需要進(jìn)行定期檢測(cè)。
(3)檢查可能造成污染的途徑和原因。
2、檢查用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清(例如批次廠商是否相同)。
3、如果排除問(wèn)題與培養(yǎng)基無(wú)關(guān)，那么可能還是細(xì)胞存在問(wèn)題。
(1)復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞，與正在培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行比較。但是需要注意的是兩種細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)分開(kāi)，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按步驟(2)～(4)的方法做排查。
(2)對(duì)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并繪制生長(zhǎng)曲線，與前面培養(yǎng)該細(xì)胞的資料進(jìn)行比較，檢查是否存在如下改變：
①傳代時(shí)是否存在接種密度過(guò)低的情況。
②細(xì)胞傳代是否過(guò)于頻繁。
③傳代前細(xì)胞平臺(tái)期是否過(guò)長(zhǎng)。
(3)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批次，檢查供應(yīng)商和批次。
(4)細(xì)胞分離過(guò)程中是否出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷細(xì)胞的情況：
①胰蛋白酶(或其他消化試劑)的消化時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng)。
②消化液的濃度和活性是否過(guò)高、過(guò)強(qiáng)。
③胰蛋白酶消化時(shí)，孵箱溫度是否正常。
④吹打消化細(xì)胞時(shí)是否過(guò)于用力。
⑤如果添加了EDTA，那么細(xì)胞是否對(duì) EDTA過(guò)于敏感。
⑥胰蛋白酶稀釋是否正確。
⑦胰蛋白酶消化液是否還在有效期內(nèi)。
二、檢查公用設(shè)備和試劑
1、孵箱溫度設(shè)定不準(zhǔn)
a、自動(dòng)調(diào)溫器損壞。
b、開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
c、孵箱門(mén)未關(guān)緊。
d、風(fēng)扇損壞造成散熱不均。
2、孵箱濕度不能維持
a、水盤(pán)中未加水。
b、孵箱有滲漏。
c、開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
d、在培養(yǎng)皿中放置一定量的PBS，每日稱(chēng)重，以檢查蒸發(fā)率。
3、孵箱的CO2濃度不準(zhǔn)
a、開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
b、CO2控制器出現(xiàn)問(wèn)題。
