分子量排阻層析（ＳＥＣ）又稱凝膠過濾層析，它根據(jù)分子量大小來分離分子。凝膠基質(zhì)由特定大小孔隙的球形小珠組成不同分子量的分子從孔中排阻通過，發(fā)生分離。小分子進(jìn)入孔內(nèi)，會(huì)延滯它們通過層析柱，而大分子避開孔，洗脫入層析柱外水體積。因此，樣品根據(jù)分子量大小進(jìn)行分離，并依照分子量遞減順序洗脫。

依據(jù)層析目的和所需的分辨率來選擇操作條件和介質(zhì)。分子量排阻層析中一種常規(guī)的方法為基團(tuán)分離，包括：

脫鹽－目標(biāo)分子洗脫出來，而小分子保留在凝膠孔內(nèi)。為了獲得理想的分離，基質(zhì)的分子量排阻限度應(yīng)比目標(biāo)分子小。

分級(jí)分離-一定分子量范圍的分子在凝膠基質(zhì)內(nèi)分離。使用這種方法時(shí)，目標(biāo)分子應(yīng)當(dāng)在凝膠的分級(jí)分離范圍以內(nèi)。

分子量排阻層析常規(guī)應(yīng)用包括蛋白分級(jí)分離及分子量確定、核酸分離、質(zhì)粒純化和多糖分級(jí)分離。

層析分辨率取決于顆粒大小，孔徑大小、流速、層析柱尺寸和樣品體積。通常，低流速（2-10cm/hr）、細(xì)長(zhǎng)柱、小顆粒凝膠、小樣品體積（總床體積的1-5%）、2倍的分子量差異以及相同的溶液粘度，可以獲得最高分辨率。如果用于脫鹽，様品體積則可達(dá)總床體積的30-40%，并可使用短粗柱。

凝膠過濾填料：